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活體成像技術：
早在1999年由美國哈佛大學Weissleder博士*提出了分子影像學(molecular imaging，MI)的概念，即應用影像學的方法對活體狀態(tài)下的生物過程進行細胞和分子水平的定性和定量研究。活體成像便是基于分子影像學孕育而生的，通過這個成像系統(tǒng)，可以觀測活體動物體內(nèi)腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移，感染性疾病的發(fā)展進程，特定基因的表達等生物學過程。
活體成像技術主要采用生物發(fā)光（bioluminescence）與熒光（fluorescence）兩種技術。
★生物發(fā)光是用熒光素酶基因標記細胞或DNA。
★熒光技術則采用熒光報告基團（GFP、RFP, Cyt及dyes等）進行標記。
★這一技術對腫瘤微小轉(zhuǎn)移灶的檢測靈敏度*，不涉及放射性物質(zhì)和方法, 非常安全。操作極其簡單、所得結果直觀、靈敏度高。
活體成像兩種檢測技術介紹
活體成像 | 特點 | 優(yōu)點 | 缺點 |
生物發(fā)光檢測 bioluminescence | ★熒光素酶（Luciferase）對基因、細胞和活體動物進行標記； ★熒光素酶催化底物（例如熒光素鉀鹽）反應后，會產(chǎn)生化學發(fā)光。這種光是由化學反應而來，不需要激發(fā)光； ★標記方法是通過克隆技術，將熒光素酶的基因插入到預期觀察的細胞染色體內(nèi)，通過對克隆細胞進行篩選，培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達熒光素酶的細胞株。再將細胞株轉(zhuǎn)移至特定的小鼠體內(nèi)形成模型。 | ★特異性強，無自發(fā)熒光； ★高靈敏度，在體內(nèi)可檢測到幾百個細胞，檢測的深度在3-4cm； ★定量精確
| ★信號較弱，檢測時間較長；★儀器精密度要求較高； ★細胞或基因需要轉(zhuǎn)基因標記； ★不可用于人體，不適用于抗體、多肽等標記 |
熒光檢測 fluorescence | ★采用熒光報告基因 (GFP、RFP等) 或熒光染料進行標記； ★需要外接激發(fā)光源，利用報告基因、熒光蛋白質(zhì)或染料產(chǎn)生的熒光，就可以形成體內(nèi)的生物光源。 | ★熒光染料、蛋白標記能力強； ★信號強，成像速度快，操作簡便，實驗成本較低； ★未來可用于人； ★適用范圍廣，可以是動物、細胞、微生物，也可以是抗體、藥物、納米材料等。 | ★存在自發(fā)熒光，影響靈敏度； ★光容易被動物組織吸收； ★檢測深度受限； ★背景光干擾，定量準確度低 |
★生物發(fā)光檢測技術相關試劑和推薦品牌(以2020年價格為例比較)
熒光素酶及對應底物 | 底物產(chǎn)品品牌 （Goldbio） | 底物產(chǎn)品品牌 （Biotium） | 底物產(chǎn)品品牌（Bio-world） | 底物產(chǎn)品品牌（sigma） | |||||||||
螢火蟲熒光素酶firefly luciferase/底物D-Luciferin （D-熒光素）
| D-Luciferin, Potassium Salt（D-熒光素鉀鹽） | D-Luciferin,Potassium Salt（D-熒光素鉀鹽） | D-Luciferin, Potassium Salt（D-熒光素鉀鹽） | D-Luciferin, Potassium Salt（D-熒光素鉀鹽） | |||||||||
LUCK-100mg | $54 | #10101/10mg | $60 | 40400076-1/50mg | $52.9 | 50227-1mg | $158 | ||||||
LUCK-500mg | $194 | #10101-1/50mg | $176 | 40400076-2/100mg | $90.05 | ||||||||
LUCK-1g | $254($199) | #10101-2/1G | $633 | 40400076-4/1g | $278.42 | 50227-1g | $1980 | ||||||
D-Luciferin, Sodium Salt（D-熒光素鈉鹽） | D-Luciferin,Sodium Salt(D-熒光素鈉鹽) | 無鈉鹽 | D-Luciferin, Sodium Salt（D-熒光素鈉鹽） | ||||||||||
LUCNA-100mg | $54 | #10102/10mg | $70 | L6882-10mg | $252 | ||||||||
LUCNA-500mg | $194 | #10102-1/50mg | $186 | L6882-50mg | $1020 | ||||||||
LUCNA-1g | $254($199) | #10102-2/1G | $633 | L6882-100mg | $1880 | ||||||||
D-LuciferinFirefly,free acid （熒光蟲熒光素游離酸） | D-Luciferin, Free Acid(D-熒光素游離酸)
| D-Luciferin Free Acid(D-熒光素游離酸)
| D-Luciferin | ||||||||||
L-123-500mg | $209 | #10100-1/50mg | $176 | 21530055-1/50mg | $465.33 | L9504/50mg | $1100 | ||||||
L-123-1g | $276 | #10100-2/1g | $633 | 21530055-1/100mg | $956.89 | L9504/100mg | $1940 | ||||||
海腎熒光素酶Renilla luciferase/ Coelenterazine（腔腸素） | Coelenterazine(天然腔腸熒光素) | Coelenterazine(天然腔腸熒光素) | 無 | Coelenterazine, native(天然腔腸熒光素) | |||||||||
CZ2.5mg | $60 | #10110/50ug | $60 | C2230-50ug | $152 | ||||||||
CZ5mg | $93 | #10110-2/250ug | $130 | ||||||||||
CZ25mg | $329 | #10110-1/1mg | $222 | ||||||||||
Coelenterazine 400 a | Coelenterazine 400a | 無 | |||||||||||
C-320-1mg | $73 | #10125/50ug | $62 | ||||||||||
C-320-10mg | $281 | #10125-2/250ug | $135 | ||||||||||
C-320-25mg | $585 | #10125-1/1mg | $233 | ||||||||||
★螞蟻淘常年現(xiàn)貨LUCK-1G |
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★活體技術熒光檢測
熒光蛋白標記 | 適用于標記細胞、病毒、基因等，通常使用的是 GFP、EGFP、RFP（DsRed）等； | |
熒光染料標記 | 適用于標記抗體、多肽、小分子藥物等；常用的有 Cy3、Cy5、Cy5.5 及 Cy7 | |
量子點標記（新的標記方法） | 適用于標記腫瘤，主要應用在活細胞實時動態(tài)熒光觀察與成像； 量子點（quantum dot) 是一種能發(fā)射熒光的半導體納米微晶體，外觀恰似一極小的點狀物。量子點熒光比有機熒光染料的發(fā)射光強的 20 倍，穩(wěn)定性強 100 倍以上，具有熒光發(fā)光光譜較窄、量子產(chǎn)率高、不易漂白、激發(fā)光譜寬、顏色可調(diào)，并且光化學穩(wěn)定性高，不易分解等諸多優(yōu)點。 |