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Lumafluor公司Red Retrobeads™ 代購現(xiàn)貨

簡要描述:Lumafluor公司Red Retrobeads™ 代購現(xiàn)貨,RetroBeads™逆向示蹤熒光微粒是Lumafluor 公司*的逆向示蹤產(chǎn)品,且是目前*證實有效的示蹤微粒

  • 產(chǎn)品型號:Red Retrobeads™
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時間:2018-01-08
  • 訪  問  量:2306
詳細(xì)資料

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螞蟻淘:4000-520-616

RetroBeads™逆向示蹤熒光微粒是Lumafluor 公司*的逆向示蹤產(chǎn)品,且是目前*證實有效的示蹤微粒(該產(chǎn)品的有效性經(jīng)數(shù)百篇從無脊椎動物到哺乳動物實驗的研究論文證實),目前Lumafluor 公司的綠色和紅色熒光示蹤微粒產(chǎn)品只能從本公司采購。
  該示蹤產(chǎn)品體內(nèi)注射高度集中不易擴(kuò)散,信號強(qiáng),對活細(xì)胞或活體無毒,且存留時間大于一年,與大多順向示蹤劑、原位雜交檢測技術(shù)、免疫組化技術(shù)兼容。

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Lumafluor高效RetroBeads操作說明

一、包裝與稀釋:

Lumafluor beads包裝于一支密封的小瓶內(nèi),內(nèi)含的濃縮beads懸浮于蒸餾水中。如使用紅色Beads作為神經(jīng)通路的逆向示蹤,其稀釋方法推薦采用:大鼠視皮層內(nèi)可采用14比例進(jìn)行稀釋而不減少Beads的熒光標(biāo)記強(qiáng)度和質(zhì)量。然而對于*實驗我們不推薦使用稀釋的Beads而使用原液進(jìn)行注射示蹤。除蒸餾水外,常規(guī)的鹽溶液如NaCl、KCl溶液也可作為稀釋液。如使用綠色Beads,則強(qiáng)烈建議使用原液,無需稀釋。

二、儲存

    為避免蒸發(fā),Bead溶液應(yīng)存放于冰箱內(nèi)4度冷藏,切忌勿冷凍! 冷凍的Beads將失去效用,無法使用。而變干的beads同樣也無法使用(無法重懸),該產(chǎn)品并無明顯的使用期限,如按要求存放可保存數(shù)年。

 

三、注射:

    Beads使用壓力注射,如1 mlHamilton微量注射器或氣壓注射系統(tǒng),如需小區(qū)域微量注射(30-50 nl),可采用末端30-50 um直徑的玻璃電極注射,而常規(guī)的逆向示蹤(注射量0.1-0.3 ul)可使用更大直徑的玻璃電極。盡管如此,即使注入更大的劑量,Beads,也不會明顯從注射位點擴(kuò)散(通常擴(kuò)散距離少于1mm),因此,為盡量*標(biāo)記投射到一個較大神經(jīng)核團(tuán)的神經(jīng)元,需使用多點注射。盡管Beads帶有負(fù)電荷,但是不建議采用離子滲透法注入示蹤Beads

四、存活時間:

    在大多數(shù)恒溫脊椎動物系統(tǒng)中,檢測Beads的zui短有效時間是24小時,在48小時內(nèi)標(biāo)記強(qiáng)度隨著體內(nèi)注射時間而延長,48小時以后熒光強(qiáng)度基本保持恒定。而在冷血動物中,檢測Beads的時間推薦為1周。目前并未檢測Beads的zui長可檢測期,然而在Beads的熒光強(qiáng)度和質(zhì)量至少可保持在體內(nèi)14個月以上不變,而細(xì)胞可能會被*標(biāo)記。目前并未發(fā)現(xiàn)Beads在動物或神經(jīng)元中表現(xiàn)出毒性作用的報道。

五、固定和處理:

    標(biāo)準(zhǔn)的固定方法是:0.1 M PBS沖洗或灌注后在4%的多聚甲醛(0.1 M PBS配制,pH 7.4)中固定,用戊二醛固定會產(chǎn)生大量的組織自發(fā)熒光,妨礙Beads標(biāo)記的神經(jīng)元,并且綠色Beads在戊二醛固定的組織中將*觀察不到,因此應(yīng)盡量避免采用。如采用冰凍切片,切片應(yīng)用PBS漂洗后用明膠包被的載玻片貼片晾干,在*風(fēng)干后,再用二甲苯透明1分鐘,然后用熒光封片劑(FluoromountKrystalon)封片。Fluoromount可從Atomergic Chemetals Corp., Farmingdale, NY)公司購買; Krystalon可從

Harleco (EM Industries,Gibbstown, NJ)購買。切片只可短期暴露在乙醇或二甲苯中,但是長時間暴露(大于5分鐘)會損壞Beads。Beads 對甘油非常敏感,在甘油環(huán)境中熒光會迅速萃滅,因此切忌使用甘油類封片劑,如無法避免,還可采用水楊酸甲酯代替甘油作為封片劑。封片后的切片如存放于黑暗環(huán)境中,熒光Beads標(biāo)記的細(xì)胞可保持一年不萃滅(但是切片的自身熒光背景會增加)。迄今為止,還沒有成功采用塑膠材料包被Beads標(biāo)記的組織的記錄。

  • 觀察:

    紅色Beads中的染料為羅丹明,因此所有與羅丹明匹配的熒光濾鏡均可使用,部分老的尼康公司的羅丹明濾鏡因背景較高,可能導(dǎo)致無法觀察到熒光Beads,通常Zeiss Leitz的標(biāo)準(zhǔn)羅丹明濾鏡可獲得較好的觀察效果。而大多綠色熒光濾鏡均可較好地觀察綠色Beads的熒光結(jié)果,設(shè)置為熒光黃的濾鏡可獲得較強(qiáng)的明亮熒光,但是同時也帶來較高的背景干擾。較寬波段的熒光濾鏡比窄波段的熒光濾鏡可以獲得更強(qiáng)的熒光信號。在長時間的觀察和拍照下Beads的熒光也不會淬滅。

  在低倍數(shù)或低數(shù)值孔徑物鏡下( X4, X10)通常難以觀察到Bads的熒光信號,只有細(xì)胞被顯著標(biāo)記,X10的油鏡(數(shù)值孔徑大于0.4)或者更大倍數(shù)的物鏡才可觀察到。通常情況下,X 25的油鏡可以清晰地觀察到低倍鏡下無法觀察到的標(biāo)記細(xì)胞。物鏡的選用對綠色熒光Beads尤其重要。在做出實驗失敗的決定前(在目標(biāo)區(qū)域無法觀察到標(biāo)記細(xì)胞),可先用油鏡仔細(xì)觀察注射位點附近的細(xì)胞是否被標(biāo)記,此處應(yīng)該觀察到大量的標(biāo)記細(xì)胞。

對使用綠色熒光Beads標(biāo)記的額外提醒:目前已發(fā)現(xiàn)綠色熒光Beads在年青動物比年老動物中標(biāo)記更為理想的情況,此外,年青動物的組織自發(fā)熒光(背景)也更低,因此,假如可以的話,在使用綠色熒光Beads做逆向標(biāo)記實驗時請盡量使用年輕動物。

因為綠色熒光Beads的激發(fā)光段比紅色熒光Beads短,因此組織自發(fā)熒光是個麻煩,因此,應(yīng)采用減少自發(fā)熒光的步驟以獲得更理想的實驗結(jié)果,這些方法有:(1)使用更薄的切片,如30微米比4050微米理想;(2)使用年青的動物;(3)封片后立即觀察拍照(隨著時間增加背景也會增加)。

    對使用色熒光Beads標(biāo)記的額外提醒:目前已發(fā)現(xiàn)綠色熒光Beads在年青動物比年老動物中標(biāo)記更為理想的情況,此外,年青動物的組織自發(fā)熒光(背景)也更低,因此,假如可以的話,在使用綠色熒光Beads做逆向標(biāo)記實驗時請盡量使用年輕動物。

    因為綠色熒光Beads的激發(fā)光段比紅色熒光Beads短,因此組織自發(fā)熒光是個麻煩,因此,應(yīng)采用減少自發(fā)熒光的步驟以獲得更理想的實驗結(jié)果,這些方法有:(1)使用更薄的切片,如30微米比4050微米理想;(2)使用年青的動物;(3)封片后立即觀察拍照(隨著時間增加背景也會增加)。

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